液相色譜儀的使用具有哪些要求呢?
液相色譜是一類分離與分析技術(shù),其特點是以液體作為流動相,固定相可以有多種形式,如紙、薄板和填充床等。在色譜技術(shù)發(fā)展的過程中.為了區(qū)分各種方法,根據(jù)固定相的形式產(chǎn)生了各自的命名,如,紙色譜、薄層色譜和柱液相色譜。那么液相色譜儀的使用具有哪些要求呢?
1、氣泡會致使壓力不穩(wěn),重現(xiàn)性差,所以在使用過程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡。
2、如果進(jìn)液管內(nèi)不進(jìn)液體時,要使用注射器吸液:通常在輸液前要進(jìn)行流動相的清洗。
3、使用緩沖溶液時,做完樣品后應(yīng)立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時,然后用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上,以充分洗去離子。對于柱塞桿外部,做完樣品后也必須用去離子水沖洗20mL以上。
4、長時間不用儀器,應(yīng)該將柱子取下用堵頭封好保存,注意不能用純水保存柱子,而應(yīng)該用有機相(如,甲醇等),因為,純水易長霉。
5、要注意柱子的pH值范圍,不得注射強酸強堿的樣品,特別是堿性樣品。
6、換流動相時應(yīng)該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動邊靖洗,然后插入新的
流動相中。換無互溶性的流動相時要用異丙醇過渡一下。
7、流動相必須用HPLC級的試劑,使用前過濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)(使用0.45μm或細(xì)的膜過濾)。
8、流動相過濾后要用超聲波脫氣,脫氣后應(yīng)該恢復(fù)到室溫后使用。
9、不能用純乙腈作為流動相,這樣會使單向閥粘住而導(dǎo)致泵不進(jìn)液。
10、每次做完樣品后應(yīng)該用溶解樣品的溶劑清洗進(jìn)樣器。
11、C18柱不能進(jìn)蛋白樣品,血樣、生物樣品。
12、堵塞導(dǎo)致壓力太大,按預(yù)柱→混合器中的過濾器→管路過濾器→單向閥檢查并清洗,清洗方法:
(1)以異丙醇作溶劑沖洗;
(2)放在異丙醇中間用超聲波清洗;
(3)用10%稀硝酸清洗。